"TÉCNICAS MACROSCÓPICAS COPROPARASITOSCÓPICAS: TAMIZADO"

 

"TÉCNICAS MACROSCÓPICAS COPROPARASITOSCÓPICAS: TAMIZADO"

*OBJETIVO
 Aprender a realizar la técnica macroscópica de tamizado, para identificar helmintos que pudiesen estar presentes en las muestras de heces.

*FUNDAMENTO
El tamizado es un método físico para separar mezclas. Consiste en hacer pasar una mezcla de partículas de diferentes tamaños por un tamiz o colador. Las partículas de menor tamaño pasan por los poros del tamiz atravesándolo y las grandes quedan retenidas por el mismo.
Es un método muy sencillo utilizado generalmente en mezclas de sólidos heterogéneos. Los orificios del tamiz suelen ser de diferentes tamaños y se utilizan de acuerdo al tamaño de las partículas de una solución homogénea, que por lo general tiene un color amarillo el cual lo diferencia de lo que contenga la mezcla.
Para aplicar el método de la tamización es necesario que las fases se presenten al estado sólido. Se utilizan tamices de metal o plástico, que retienen las partículas de mayor tamaño y dejan pasar las de menor diámetro.
En parasitología la técnica de tamizado es usada para detectar a los parásitos que pudiesen quedar atrapados (trematodos, cestodos, nematodos). Esta, permite observar  directamente las características morfológicas de los parásitos adultos, enteros o fraccionados.
MATERIAL:
·         Coladera de tamiz fino
·         Abatelenguas
·         Caja Petri
·         Pinzas
·         Portaobjetos
·         Cubreobjetos
·         Microscopio

*SUSTANCIAS:
·         Agua
·         Solución salina al 0.9%
·         Muestra biológica: heces fecales frescas

*PROCEDIMIENTO
1.    Colocar pequeñas porciones de materia fecal en el tamiz con ayuda del abatelenguas.
2.    Dispersar la muestra con el abatelenguas y agregarle agua hasta lograr un tamizado lo más limpio posible.
3.    Revisar cuidadosamente las partículas de las heces que hayan quedado en la coladera..
4.    Los parásitos encontrados se colocan en una caja Petri con solución salina. Para fines didácticos, se vació todo el tamizado en la caja Petri para facilitar su observación.
5.    Se identifica al parásito, parte o estructura sospechosa de ser parásito.
6.    Se reporta el género y la especie del parasito. Si no se puede identificar macroscópicamente, se usa el microscopio para una mejor identificación.


**OBSERVACIONES

Lamentablemente al hacer esta practica solo se obtuvieron restos de alimentos, fibras vegetales, semillas pequeñas y aparentemente un tricosefalo, al principio en la caja petri si pensamos que eran helmintos, pero ya al checar con un examen microscopico nos dimos cuenta que no fue así. 

METODO DE CONCENTRACION POR FLOTACION WILLIS

 

METODO DE CONCENTRACION POR FLOTACION WILLIS

OBJETIVO
Aprender a realizar diferente métodos para la identificación y estudio de los parásitos en este caso la búsqueda de huevos y quistes.

FUNDAMENTO
Willis en 1921, describe este método basado en la propiedad que tienen las soluciones de densidad mayor de hacer flotar objetos menos densos.
Este método está recomendado específicamente para la investigación de protozoarios y helmintos, consiste en la preparar la materia fecal con solución saturada de cloruro de sodio.

Método de concentración por flotación simple.

·         Se usa para la búsqueda e identificación de formas parasitarias como quistes, huevos y helmintos.

·         Se evalúa una gran porción de la muestra.

·         Sensibilidad alta.

·         Fácil rápida y económica.

Es un método de concentración por flotación simple: 
en este caso se usa salmuera.
Consiste en preparar el material fecal con Solución saturada de ClNa.

Utilidad
Recomendado especialmente para la investigación de geohelmintos. 
Por su sencillez se puede utilizar en el campo, donde no se cuentan con demasiados materiales o reactivos para realizar otros métodos.
Los Huevos de helmintos de peso específico menor que la solución saturada de NaCl tienden a subir y adherirse a una lámina colocada en contacto con la superficie del líquido.
Este método es de alta sensibilidad en el diagnóstico de huevos livianos de helmintos: A. duodenale, N. americanus, A. lumbricoides, H. nana.
Limitaciones
los huevos y quistes de peso específico menor que la solución saturada de cloruro de sodio tienden a adherirse a un cubreobjetos colocado

* No indicado en la búsqueda de huevos pesados ni de larvas.

MATERIAL
·         Vaso de precipitado

·         Embudo

·         Tubo de ensaye

·         Portaobjetos

·         Cubreobjetos

·         abate lenguas


REACTIVOS
·         Sol. Saturada de NaCl

·         Sol. De yodo lugol

PROCEDIMIENTO:
1.- Tomar aproximadamente1gr de heces fecales con un abate lenguas.
2.- Colocar la muestra en un vaso de precipitado y mezclar con 10ml de solución saturada de cloruro de sodio.
3.En un tubo de ensaye filtre la mezclar con una gasa, llenando completamente el tubo.
4.-Coloque un portaobjetos sobre el tubo de manera que el líquido haga contacto con el portaobjetos.
5.-Esperamos de 5 a 10 minutos.
6.-Los quistes o huevos flotaran y quedaran adheridos a la cara del portaobjetos que está en contacto con la mezcla.
7.-Colocar una gota de yodo lugol en el porta objetos y colocar el cubreobjetos
8.-Examinar la muestra al microscopio con el objetivo 40x, buscamos quistes o huevecillos de parásitos.
9. Reportar los resultados.


RESULTADOS:
Lamentablemente las muestras que manejados fueron de pacientes sanos y no se nos hizo posible encontrar algún parásito de relevancia, solo fueron hallados restos de comida y fibra.  Esta práctica es mas sencilla pero muy util, facil de hacer a comparación de las demás. 

"Método de concentración por sedimentación"
Ritchie
FUNDAMENTO:
Se basa en la concentración de los quistes y huevos por sedimentación mediante la centrifugación, con la ayuda del formol y éter para separar y visualizar los elementos parasitarios.
Una de las ventajas que tiene este método es concentrar y no deformar las formas parasitarias, permite el transporte y almacenamiento de la materia fecal procesada antes de ser examinada, se usa cuando se necesita una técnica para evaluación de tratamiento y determinación de frecuencia.

Soluciones:
·         Solución salina isotónica
·         Solución de formaldehido al 10%
·         Éter

MATERIAL:
·         Centrifuga
·         Tubos de ensaye cónicos 15ml.
·         Gasas cortadas en cuadros
·         Embudos pequeños de cristal
·         Vasos de precipitado 50 ml.
·         Aplicadores de madera
·         Abate lenguas
·         Pipetas Pasteur con bulbo
·         Portaobjetos
·         Cubreobjetos
·         Microscopio
Reactivos biológicos del ser humano:
·         Heces (de un paciente que tenga diarrea o mucosidad)


MÉTODO:
1)    Se coloca un poco de materia fecal en el vaso de precipitado aproximadamente 1gr o empíricamente el tamaño de una nuez pequeña esta se coloca con ayuda del abate lengua, se añaden 10ml de solución salina y esta se mezcla.
2) Se filtra la suspensión a  través de la gasa colocada en el embudo esta doblada en 4 partes, recogiendo el filtrado en el tubo cónico.
3)  Se centrífuga la suspensión durante 2 minutos a 2000 rpm., se decanta el sobrenadante y se resuspende el sedimento con la solución salina, centrifugando, decantando y resuspendiendo 2 veces más. 
4)    Al último sedimento se agregan 5ml de solución de formaldehido al 10% se mezcla y se deja reposar durante 10 min.
5) Se añaden después 0.5 ml. De éter, se tapan los tubos con tapones de caucho y se agitan energéticamente durante 30 segundos.
6)    Se centrifuga durante 2 minutos a 2000 rpm.



7)    Después de centrifugar se observan 4 capas:
·         Éter superficial
·         Restos fecales
·         Formaldehido
·         Sedimento en el fondo del tubo.
8)    Se decanta el sobrenadante, se introduce la pipeta Pasteur hasta el sedimento, se extrae con cuidado una gota del sedimento y se coloca en un portaobjetos.
9)    Se le añade una gota de yodo lugol y este se cubre con el cubre objetos de manera que se puede observar que estos se homogenizan.
  
10)  Estos se observan en el microscopio con el objetivo seco débil (10X) y seco fuerte (40X)
 RESULTADOS:
En la muestra solo se lograron observarse residuos de grasa.

CONCLUSIONES:
Es la primera vez se realiza esta practica, y pudimos ver que es similar a la de Faust, lamentablemente no logramos observar quistes o huevecillos de algún parásito, ya se menciono que lo único que se observo fue grasa. Esperamos que para la siguiente ocasión ya se logren identificar otras cosas interesantes.

"TÉCNICA DE FAUST" "Bis"

Práctica 2. Parasitología

"TÉCNICA DE FAUST"  "Bis"

OBJETIVO
Buscar en las muestras biológicas la presencia de los distintos parásitos para tener un conocimiento más amplio sobre ellos.
FUNDAMENTO:
Se conoce como técnica de Faust, ya que fue él quien la diseño en 1938. Es una de las más populares, se utiliza prácticamente en todos los laboratorios del sector salud y privados.
Ventaja y Desventajas
Esta técnica es mejor para quiste y protozoos que para huevos y larvas de helmintos. El éxito depende de la exactitud en la densidad del sulfato de Zinc. El contacto prolongado con el sulfato de zinc, puede deformar los quiste y dificultar su identificación, por lo tanto estas preparaciones debe ser examinan lo antes posible

MATERIAL

·         Porta objetos.
·         Cubreobjetos.
·         Gasas.
·         Tubos de ensayo.  
           Embudo
           Solución acuosa de sulfato de Zn.
           Vaso de precipitado
           Abate lenguas

    Muestras biológicas
·         Heces

PROCEDIEMIENTO
1) Mezclar bien una porción de materia fecal para preparar una superficie en 10 partes de agua destilada.
2) Filtrar la suspensión a través de una gasa doblada en cuatro, sobre un tubo de centrifuga, ayudándose con un embudo pequeño.
3) Centrifugar el filtrado a 2500 rpm por 1min.
4) Decantar el liquido sobrenadante y completar con agua hasta igualar la medida anterior, centrifugar nuevamente. Re suspender el sedimento.
5) Repetir el procedimiento hasta 2 veces hasta que el liquido sobrenadante este listo.
6) Decantar nuevamente el líquido sobrenadante remplazándolo por igual cantidad de solución de sulfato de Zn al 33%. Mezclar bien la solución bien la solución con el sedimento. Centrifugar durante 1 minutos por 1500 rpm.
7) Tomar de 3-4 gotas de las partículas que flotan en la superficie del liquido. Colocarlos en un porta-objeto y mezclar con 1-2 gotas de lugol, colocar cubre-objeto
8) Examinar al microscopio y reporte sus resultados.

OBSERVACIONES
En una de las dos muestras solo se logro identificar fibra.

*COMENTARIO
Esta es la segunda ocasión en la que realizamos esta técnica, ya se realiza de mejor manera  y sin muchos errores, aunque aun existen algunos percances.