miércoles, 4 de diciembre de 2013

"Método de concentración por sedimentación"
Ritchie
FUNDAMENTO:
Se basa en la concentración de los quistes y huevos por sedimentación mediante la centrifugación, con la ayuda del formol y éter para separar y visualizar los elementos parasitarios.
Una de las ventajas que tiene este método es concentrar y no deformar las formas parasitarias, permite el transporte y almacenamiento de la materia fecal procesada antes de ser examinada, se usa cuando se necesita una técnica para evaluación de tratamiento y determinación de frecuencia.

Soluciones:
·         Solución salina isotónica
·         Solución de formaldehido al 10%
·         Éter

MATERIAL:
·         Centrifuga
·         Tubos de ensaye cónicos 15ml.
·         Gasas cortadas en cuadros
·         Embudos pequeños de cristal
·         Vasos de precipitado 50 ml.
·         Aplicadores de madera
·         Abate lenguas
·         Pipetas Pasteur con bulbo
·         Portaobjetos
·         Cubreobjetos
·         Microscopio
Reactivos biológicos del ser humano:
·         Heces (de un paciente que tenga diarrea o mucosidad)


MÉTODO:
1)    Se coloca un poco de materia fecal en el vaso de precipitado aproximadamente 1gr o empíricamente el tamaño de una nuez pequeña esta se coloca con ayuda del abate lengua, se añaden 10ml de solución salina y esta se mezcla.
2) Se filtra la suspensión a  través de la gasa colocada en el embudo esta doblada en 4 partes, recogiendo el filtrado en el tubo cónico.
3)  Se centrífuga la suspensión durante 2 minutos a 2000 rpm., se decanta el sobrenadante y se resuspende el sedimento con la solución salina, centrifugando, decantando y resuspendiendo 2 veces más. 
4)    Al último sedimento se agregan 5ml de solución de formaldehido al 10% se mezcla y se deja reposar durante 10 min.
5) Se añaden después 0.5 ml. De éter, se tapan los tubos con tapones de caucho y se agitan energéticamente durante 30 segundos.
6)    Se centrifuga durante 2 minutos a 2000 rpm.



7)    Después de centrifugar se observan 4 capas:
·         Éter superficial
·         Restos fecales
·         Formaldehido
·         Sedimento en el fondo del tubo.
8)    Se decanta el sobrenadante, se introduce la pipeta Pasteur hasta el sedimento, se extrae con cuidado una gota del sedimento y se coloca en un portaobjetos.
9)    Se le añade una gota de yodo lugol y este se cubre con el cubre objetos de manera que se puede observar que estos se homogenizan.
  
10)  Estos se observan en el microscopio con el objetivo seco débil (10X) y seco fuerte (40X)
 RESULTADOS:
En la muestra solo se lograron observarse residuos de grasa.

CONCLUSIONES:
Es la primera vez se realiza esta practica, y pudimos ver que es similar a la de Faust, lamentablemente no logramos observar quistes o huevecillos de algún parásito, ya se menciono que lo único que se observo fue grasa. Esperamos que para la siguiente ocasión ya se logren identificar otras cosas interesantes.


























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